Rotavirus A genotype G1P[8]: a novel method to distinguish wild-type strains from the Rotarix® vaccine strain

Rotaviruses are important enteric pathogens for humans and animals. Group A rotaviruses (RV-A) are the most common agents of severe gastroenteritis in infants and young children and vaccination is the most effective method to reduce RV-A-associated diseases. G1P[8], the most prevalent RV-A genotype worldwide, is included in the RV-A vaccine Rotarix®. The discrimination between wild-type G1P[8] and vaccine G1P[8] strains is an important topic in the study of RV-A epidemiology to manage outbreaks and to define control measures for vaccinated children. In this study, we developed a novel method to segregate the wild-type and vaccine strains using restriction endonucleases. The dsRNA from the Rotarix® vaccine was sequenced and the NSP3 gene was selected as the target gene. The vaccine strain has a restriction pattern that is different than that of wild-type RV-A G1P[8] isolates after digestion with the restriction endonuclease BspHI. This pattern could be used as a marker for the differentiation of wild-type G1P[8] strains from the vaccine strain.

Etiologia de exantema em crianças em uma área endêmica de dengue / Etiology of exanthema in children in a dengue endemic area

OBJETIVO: Estudar a etiologia dos casos de exantema com ou sem febre em crianças atendidas no pronto-socorro de um hospital de uma zona endêmica para dengue. MÉTODOS: No período de 21/09/2001 a 20/09/2002, foram inscritas no estudo 95,9 por cento (71/74) das crianças atendidas no pronto-socorro do Hospital Universitário de Campo Grande (MS) que apresentassem exantema (percentual de recusa de 4,1 por cento). Após preenchimento do protocolo com os dados das crianças, as mesmas foram submetidas a exame físico seguido da coleta de amostras de sangue para realizar hemograma com contagem de plaquetas e sorologias (IgM e IgG); inicialmente para dengue, rubéola e toxoplasmose e, posteriormente, naqueles casos com resultado negativo, realizou-se sorologia para parvovirose, herpes vírus tipo 6 e sarampo. RESULTADOS: O diagnóstico laboratorial foi confirmado através da pesquisa de anticorpo IgM em 88,7 por cento dos casos investigados: dengue (77,5 por cento), herpes vírus tipo 6 (8,4 por cento), parvovirose (2,8 por cento) e diagnóstico inconclusivo em oito pacientes (11,3 por cento). Não foi evidenciada sorologia positiva (IgM) para sarampo, rubéola ou toxoplasmose naquela ocasião. As manifestações clínicas mais freqüentes nos pacientes com dengue foram: febre, prurido, prostração, mialgia e prova do laço positiva. Nos pacientes cujo diagnóstico foi dengue, a prova do laço foi positiva em 58,4 por cento (32/55) dos casos, demonstrando diferença estatisticamente significativa quando comparada com o grupo cujo diagnóstico não foi dengue. CONCLUSÕES: Nas crianças com exantema, dengue pode ser a principal enfermidade causal, atentando-se para a epidemiologia do local. É necessário um controle constante da vigilância epidemiológica e sorológica das doenças exantemáticas.

OBJECTIVE: To study the etiology of exanthema cases, with or without fever, in children seen in the emergency room of a hospital located in a region where dengue is endemic. METHODS: Enrollment took place between 21/09/2001 and 20/09/2002 and included 95.9 percent (71/74) of children presenting with exanthema at the emergency room of the Hospital Universitário de Campo Grande, MS (4.1 percent refusals). After the children had had their details taken and entered on the study protocol, they were subjected to physical examination followed by collection of blood samples for blood testing with platelet counts and serology (IgM and IgG); initially for dengue, rubella and toxoplasmosis and then, in negative cases, serology was also run for parvovirus, herpes virus type 6 and measles. RESULTS: Laboratory diagnoses were confirmed by means of IgM antibody assay in 88.7 percent of the cases investigated: dengue (77.5 percent), herpes virus type 6 (8.4 percent), parvovirus (2.8 percent) and in eight patients diagnosis was inconclusive (11.3 percent). On this occasion no positive serology (IgM) was observed for measles, rubella or toxoplasmosis. The most common clinical manifestations among the dengue patients were: fever, itching, prostration, myalgia and positive tourniquet test results. In 58.4 percent (32/55) of those cases diagnosed with dengue, the tourniquet test was positive, which was a statistically significant difference when compared with the remainder of the sample. CONCLUSIONS: When children present with exanthema, it is possible that dengue is the primary causative disease, depending on the epidemiology of the location. Constant control of epidemiological and serological surveillance of exanthematous diseases is necessary.

Molecular typing of dengue virus type 2 in Brazil

Strain typing is a critical tool for molecular epidemiological analysis and can provide important information about the spread of dengue viruses. Here, we performed a molecular characterization of DEN-2 viruses isolated in Brazil during 1990-2000 from geographically and temporally distinct areas in order to investigate the genetic distribution of this serotype circulating in the country. Restriction site-specific polymerase chain reaction (RSS)-PCR presented the same pattern for all 52 Brazilian samples, showing the circulation of just one DEN-2 variant. Phylogenetic analysis using progressive pairwise alignments from 240-nucleotide sequences of the E/NS1 junction in 15 isolates showed that they belong to genotype III (Jamaica genotype)

Dengue virus type 3 isolation from Aedes aegypti in the municipality of Nova Iguaçu, State of Rio de Janeiro

In a prospective field study conducted from July 2000 to June 2001, adult Aedes aegypti and Ae. albopictus mosquitoes were caught from the municipality of Nova Iguaçu, State of Rio de Janeiro, Brazil. Virus isolation in Ae. albopictus clone C6/36 cell line and a semi-nested reverse transcription-polymerase chain reaction detected only dengue virus type 3 in three pools of Ae. aegypti, despite the co-circulation of DEN-1, DEN-2 and DEN-3 serotypes in that area. No viruses were detected in Ae. albopictus mosquitoes. This virological surveillance consists in a sentinel system alerting for dengue outbreaks

Dengue virus type 3 in Rio de Janeiro, Brazil

Dengue virus type 3 was isolated for the first time in the country as an indigenous case from a 40 year-old woman presenting signs and symptoms of a classical dengue fever in the municipality of Nova Iguaçu, State of Rio de Janeiro. This serotype has been associated with dengue haemorrhagic epidemics and the information could be used to implement appropriate prevention and control measures. Virological surveillance was essential in order to detected this new serotype

Dengue type 2 outbreak in the south of the state of Bahia, Brazil: laboratorial and epidemiological studies

Em marco de 1994, casos de uma doenca exantematica foram notificados nos municipios de Itagimirim, Eunapolis e Belmonte, sul da Bahia. Infeccao por dengue foi confirmada por sorologia (MAC-ELISA) e pelo isolamento de virus dengue tipo 2 (genotipo Jamaica). Sinais e sintomas de dengue classico foram observados com um alto percentual de exantema (73,8 por cento) e prurido (50,5 por cento). Manifestacoes hemorragicas nao foram importantes e apenas casos de gengivorragia foram descritos. A atividade dos virus dengue espalhou-se rapidamente para importantes areas de turismo da regiao, tais como Porto Seguro, Ilheus, Santa Cruz de Cabralia, Prado, Alcobaca e outros, representando um risco da dispersao do virus para outras regioes do pais e exterior.

Secondary dengue infection in schoolchildren in a dengue endemic area in the state of Rio de Janeiro, Brazil

Apos um periodo de epidemias sequenciais pelos virus dengue tipo 1 e 2 (DEN-1 e DEN-2), foi realizado um estudo soroepidemiologico e uma amostra de escolares da rede publica de ensino do municipio de Niteroi; 450 amostras de sangue foram obtidas atraves de puncao da polpa digital, coletadas sobre discos de papel de filtro e testadas para a deteccao de anticorpos inibidores da hemaglutinacao (IHA) para DEN-1 e DEN-2. Das amostras testadas, 66,0 por cento (297/450) apresentaram titulos de anticorpos IHA e as medias geometricas dos titulos de anticorpos foram de 1/182 e 1/71, para DEN-1 e DEN-2, respectivamente. Cerca de 61,0 por cento (181/297) daqueles com anticorpos IHA tiveram infeccao secundaria. Destes, 75 por cento (135/181) tinham idade igual a ou menor do que 15 anos...

Dengue epidemic in the state of Rio de Janeiro, Brazil: virological and epidemiological aspects

Laboratory studies were carried out on 3178 patients with signs and symptoms suggestive of dengue infection from April 1986 to December 1987 in the State of Rio de Janeiro, Brazil. The epidemic had two peaks following the first virus isolation and affected the inhabitants of 17 counties. Both sex and all age groups were affected. Dengue virus type 1 was isolated from 1039 sera and the number of confirmed cases was increased to 1874 (59) by MAC-ELISA. Isolation rate confirmed cases reached 80 in the specimens obtained until the 4th day after the onset of disease and viraemia ranged from 10(3.0) to 10(8.5) TCID50/ml.

Use of MAC-ELISA for evaluation of yellow fever vaccination

An evaluation of the IgM antibody immune response against yellow fever using strain 17D was carried out by MAC-ELISA and PRNT. The results showed an agreement of 97% between both tests and the authors conclude that MAC-ELISA can be used as a specific and sensitive assay to replace the PRNT for detecting yellow fever antibodies in human sera, after vaccination programs

Virological study of a dengue type 1 epidemic at Rio de Janeiro

Uma epidemia de dengue iniciou-se em março de 1986, no Rio de Janeiro, alcançando rapidamente outras partes do país. Febre dengue clássica foi observada, porém o vírus do dengue foi isolado de um caso fatal. As amostras de dengue 1 isoladas de pacientes e de fêmeas adultas de Aedes aegypti capturadas na área apresentaram efeito citopático na linhagem de células A. albopictus clone C6/36. A lesäo celular foi estudada também em microscopia eletrônica, sendo descritos os dados observados. Um teste de captura para IgM (MAC-ELISA) foi utilizado durante a epidemia tanto para o diagnóstico como para avaliarr a circulaçäo de vírus, com resultados claros e reprodutíveis; os anticorpos IgM apareceram precocemente após o início da doença clínica, permanecendo por cerca de 90 dias na maioria dos pacientes. A reaçäo mostrou-se tipo específico em cerca de 50% dos pacientes, porém, um alto nível de respostas heterológas para dengue tipo 3 foi observado nos demais pacientes

Comparaçäo de métodos para determinaçäo de anticorpos para rubéola na fraçäo IgM: ultracentrifugaçäo em gradiente de sacarose e cromatografia em microcoluna de Sephacryl S-300 / Comparison of methods for rubella IgM antibody determination: sucrose density fractionation and microcolumn chromatography using Sephacryl S-300

Os métodos de ultracentrifugaçäo em gradiente de sacarose e cromatografía em microcolunas de Sephacryl S-300 foram comparados na pesquisa de anticorpos da classe IgM para rubéola. Após o fracionamento das imunoglobulinas, empregou-se a reaçäo de inibiçäo da hemaglutinaçäo para determinar os anticorpos das fraçöes. O uso de microcolunas representa uma metodologia simples e rápida, com resultados seguros entre as 1ª e 3ª semanas após o início da doença. Pela fácil execuçäo e baixo custo, pode ser aplicada na separaçäo de imunoglobulinas, encontrando uma ampla aplicaçäo no laboratório clínico para o estudo de diferentes agentes